Antecedentes

La naranja es el fruto cítrico más ampliamente producido y consumido en la dieta Europea y Americana. Existen pocos estudios en alergia a naranja, algunos de ellos realizados incluso sin alergenos a naranja, con ácaros de naranja, con componentes menores no proteicos de aceite de naranja de cítricos o reacciones no mediadas por IgE. No se han identificado alergenos a la naranja. El único antecedente es un estudio en 6 pacientes pediátricos con síndrome de alergia oral a naranja que identificó un componente reactivo de 13kDa que podría corresponder a una proteína de transferencia de lípidos (PTL). Las PTL de plantas son polipéptidos básicos de aproximadamente 9 kDA (91-95 aminoacidos) que han sido identificados como alergenos relevantes en varios alimentos y pólenes. PTL son muy resistentes a la digestión gástrica y al tx con calor y parecieran estar ligadas con síntomas sistémicos y severos e inducir sensibilización vía oral en pacientes con alergia a frutas. PTL han sido propuestas como alergenos modelos de alergia a alimentos. En España 60-90% de los pacientes con alergia al durazno tienen pruebas cutáneas positivas al alergeno mayor de PTL de durazno Pru p 3.

Material y Métodos

Pacientes y suero. 27 pacientes con reacciones adversas tras la ingestión de naranja con los siguientes criterios. Historia clínica de alergia a naranja confirmada con una prueba de reto abierta con el alimento. Respuesta positiva a prueba prick-by-prick. IgE específica a naranja mayor de 0.35kU/l. 26 pacientes tenían sensibilidad a polen, 19 tenían prueba positiva prick-by-prick a durazno y 18 de estos tenían historia de reacción alérgica a durazno. Se utilizó suero de 5 pacientes con alergia a ácaros pero no a plantas de alimentos o pólenes como controles negativos.

Extractos de frutos cítricos. Se extrajo la pulpa de naranja y limón frescos y posteriormente fueron licuados. Los jugos y cáscaras fueron congelados en seco por separado y después procesados por una técnica específica (para detalles técnicos favor de referirse al artículo original).

Aislamiento y caracterización de PTL alergénicos de cítricos. Se aislaron PTL alergénicos naturales de naranjas y limones de los extractos de cascara de las frutas. Se purificó PTL alergénica recombinante de naranja del sobrenadante de un medio de cultivo de Pichia pastoris. Pru p 3 natural y recombinante (alergeno mayor y PTL) de durazno.

Se aisló la secuencia de cDNA de PTL recombinante de naranja. Se midio la unión de IgE específica a nCit s 3.0101 y nCit l 3, y a rCit s 3.0102 y a rPru p 3 en el suero de los 27 pacientes y de los controles negativos. Se midió además inhibición de ELISA para los alergenos. Se realizaron pruebas cutáneas por prick con las PTL alergenos purificadas en antebrazo

Resultados

Mediante inmunodetección con antisuero policlonal de conejo a PTL Pru p 3 de durazno, se buscó las supuestas PTL presentes en el extracto de naranja. Se reconoció una banda de proteínas de 10kDa en ambos extractos. La misma banda se identificó en ambos extractos por la IgE del pool de sueros de pacientes alérgicos a naranja pero no en el suero de los controles negativos. Estos componentes reactivos se aislaron del extracto de la cáscara por cromatografía. Se purificó el alergeno designado como nCit s 3.0101 (comité intenacional de nomenclatura de alergenos). Con un peso molecular de 9,610 Da, 12 de 20 residuos identicos a Pru p 3 de durazno, lo cual permite incluir a nCit s 3 en la familia de panalergenos de PTL. Se identificó además el alergeno designado nCit l 3, con masa molecular 9,618 Da, homólogo a nCit s 3 heterogeneo en la posición 8 (G/A) y 18 de 20 residuos idénticos a nCit s 3.

Secundariamente, se aisló una isoforma de la PTL de naranja: rCit s 3.0102, compartiendo 16 de 20 residuos en la región N-terminal respecto a la determinada en nCit s 3; y 67% de similitud en la secuencia de aminoácidos de rPru p 3. Los 3 alergenos de cítricos purificados, junto con Pru p 3 de durazno fueron medidos in vitro e in vivo en el grupo de pacientes con alergia a naranja: rPru p 3 es claramente reconocido por IgE del suero de estos pacientes. IgE específica para nCit l 3 en 54% de los sueros analizados, a nCit s 3 en 48%, a rCit s 3 en 46% y a rPru p 3 en 37%. 8 sueros (30%) no reconocieron a ningún alergeno. Siete (26%) detectaron todos los alergenos

Reactividad in vivo: se encontraron pruebas cutáneas positivas en 38% de los 26 pacientes medidos con nPru p 3 y en 27% para nCit s 3. Ocho pacientes fueron evaluados con nCit l 3 con 3 (37%) reactivos. Se encontró IgE específica a un alergeno particular en todos los casos de respuesta positiva en pruebas cutáneas excepto el paciente No. 26. Estos datos sugieren que las PTL alergenas de naranja, limón y durazno tienen reactividad cruzada parcial.

Discusión

La variante alergénica mayor de frutos de la familia Rosaceae, como Pru p 3, esta localizada principalmente en la cáscara, esto apoyando el hecho de que la cáscara de durazno muestra una mayor potencia alergénica que la pulpa. nCit s 3 se encuentran en la pupa y la cáscara de naranja, pero esta última mucho más reactiva. Este dato, junto con el hecho de que la frutas cítricas se comen usualmente peladas puede ser clínicamente relevante tanto para la baja prevalencia y los síntomas leves en respuestas alérgicas a estas frutas. Existe una correlación significativa entre la unión de IgE a nCit s 3 y rCit s 3. Así, la forma recombinante puede ser una herramienta nueva y útil para el diagnóstico de alergia a frutos cítricos. Estos datos llevan a considerar a las PTL como alergenos verdaderos y relevantes de naranjas

Conclusiones

Este estudio representa un avance en la caracterización de los epítopes alergénicos de citrícos, lo que da pauta a una posibilidad especifíca de evaluación de sensibilidad en pacientes con datos clínicos de alergia a cítricos. La frecuencia de positividad y reactividad cruzada es importante pero no contundente para demostrar esta posibilidad ya que no realiza un análisis estadístico que permita definir mejor esta asociación, porque aproximadamente la mitad de los pacientes tuvieron resultados negativos a alguna de estas PTL. La posibilidad de contar con una nueva herramienta diagnóstica específica podría abrir la puerta al tratamiento para la alergia a alimentos

Comentario:

El Dr. Joaquín Sastre, uno de los autores de este artículo, participará en el Curso de Alergia a Alimentos con los temas: Manifestaciones cutáneas y respiratorias de alergia a alimentos. El Dr. Sastre ocupa la jefatura de Servicio de Alergia de la Fundación Jiménez Díaz de Madrid, y es profesor del departamento de Medicina de la Facultad de Medicina de la Universidad Autónoma de Madrid.

Curso de Alergia a Alimentos: Monterrey 15 de Septiembre, Hotel Intercontinental.

Informes al 01800 215 0969 y al 0181 8348 2459

Dra. med. Sandra N. González Díaz

Dra. Lucía Leal de Hernández

Dr. Dagoberto Cid Guerrero

Dra. Alejandra Macías Weinmann